la cordonnerie
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Cinétique enzymatique
1ère S : TP 06

Action de la peroxydase du radis noir sur l’eau oxygénée.

Article mis en ligne le 13 octobre 2009
dernière modification le 22 octobre 2009

par Jean-Louis
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Matériel nécessaire :

Deux tubes à essai avec bouchons, étiquetés tube 1 et tube 2.
- le tube 1 contient 10 ml de tampon pH 7, + 5 ml de gaïacol + 5 ml d’H2O2 à 3/100. On mettra 3,5 ml dans chaque cuve à face parallèle du colorimètre (vérifier en fonction de la taille) + l’enzyme en quantité variable.
- le tube 2 contient 10 ml de tampon pH 7 + 5 ml de gaïacol ; on en met 2,5 ml dans chaque cuve.
- 3 petits tubes à essai contiennent 5 ml d’H2O2 à 1/100, 3/100 et 1/500. On mettra 1 ml dans chaque cuve à face parallèle du colorimètre, + l’enzyme en quantité fixe.

- L’enzyme est préparée à partir de radis noir passé au mixer avec de l’eau et filtré. Il en faut environ 50 ml par groupe. Fractionner dans des petits Ependorf.

- pipettes en plastique (4 par groupes) ;
- 4 pailles pour agiter juste après l’introduction de l’enzyme.
- cuvette pour matériel sale.
- pissette d’eau distillée.
- caches du colorimètre
- 1 pipette graduée pour mesurer 1 ml de substrat dans l’expérience 2.

Penser à fermer les rideaux pendant la mesure.

Résultats :
on obtient des courbes qui ont une forme comme celle-ci :

Noter soigneusement les pente à l’origine (le logiciel de Jeulin, vous donne directement la pente)

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